紫外分光光度計的原理

紫外分光光度計，就是根據物質的吸收光譜研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。紫外分光光度計可以在紫外可見光區意選擇不同波長的光。物質的吸收光譜就是物質中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應地發生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質具有不同的分子 、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的低判別或測定該物質的含量。

作原理
物質的吸收光譜本質上就是物質中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應地發生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會相同。因此，每種物質就有其*的、固定的吸收光譜曲線，可根據吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的低判別或測定該物質的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。分光光度分析就是根據物質的吸收光譜研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。

又因為許多物質在紫外-可見光區有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法對這些物質分別行測定(定量分析和定性分析)。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。

分光光度法定量分析的依據和基礎。當入射光波長定時，溶液的吸光度A是吸光物質的濃度C及吸收介質厚度l(吸收光程)的函數。

確定實驗條件，并在此條件下測得標準物質的吸收峰以及其對應波長值(大吸收波長);再在選定的波長范圍內(大波長值處)，分別以(不同濃度)標準溶液的吸光度和溶液濃度為橫、縱坐標繪出化合物溶液的標準曲線得到其所對應的數學方程;接著在相同實驗條件下配制待測溶液，測得待測溶液的吸光度，用已獲得的標準曲線方程求出待測溶液中所需測定的化合物的含量。

校正方法
紫外分光光度計的校正方法:分光光度法的重要的個物理化學量是吸光度。為了獲得準確的研究結果，準確測得樣品溶液的吸光度是非常重要的。般，分析結果的不可靠性與偶然誤差和系統誤差有關。偶然誤差影響測量的密度，可通過足夠數量測量的統計處理來減少;系統誤差影響測量結果的準確度，可在大體相同實驗條件下，用種物質的準確測量結果，使系統誤差統起來。而分光光度計的系統誤差(波長校正、分光光度計的慢散光、放大器的線性響應、暗電流和比色皿的光程)和操作誤差(溫度改變、儀器讀數、操作者的改變、使用物質的純度、稱量和濃度、pH)對測量吸光度的影響是可以檢查和校正的。關于操作誤差，多數情況下，通過嚴格按操作程序測量、儀器調零、準確稱量等來控制或減少這種誤差的產生